Recombineering (recombination-mediated genetic engineering) is a genetic and molecular biology technique based on homologous recombination systems, as opposed to the older/more common method of using restriction enzymes and ligases to combine DNA sequences in a specified order. Recombineering is widely used for bacterial genetics, in the generation of target vectors for making a conditional mouse knockout, and for modifying DNA of any source often contained on a bacterial artificial chromosome (BAC), among other applications.
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| - Recombineering (englisch von recombinogenic engineering) bezeichnet eine molekularbiologische Methode zur Manipulation von DNA, basierend auf der homologen Rekombination von Escherichia coli, die unter dem Synonym Red/ET Rekombination bekannt ist.
- Recombineering (da recombination engineering, ingegneria di ricombinazione) è una tecnica di modificazione del DNA basata sulla ricombinazione omologa dell'Escherichia coli. In particolare, il sistema di ricombinazione omologa è alquanto diverso da quello classico dell'ospite batterico basato sulle proteine RecBCD e RecA. Il sistema di ricombinazione omologa impiegato nel recombineering è caratterizzato da un'attività esonucleasica, rappresentata dalla proteina Redalpha (5'>3' esonucleasi) e da un'attività di annealing rappresentata da Redbeta. Entrambe queste proteine sono codificate dal fago lambda (geni exo e bet rispettivamente). Una terza proteina (Redgama, codificata dal gene gam) incrementa l'efficacia di questo sistema inibendo un'attività esonucleasica dell'ospite (RecBCD). In alt
- Recombineering (recombination-mediated genetic engineering) is a genetic and molecular biology technique based on homologous recombination systems, as opposed to the older/more common method of using restriction enzymes and ligases to combine DNA sequences in a specified order. Recombineering is widely used for bacterial genetics, in the generation of target vectors for making a conditional mouse knockout, and for modifying DNA of any source often contained on a bacterial artificial chromosome (BAC), among other applications.
- Recombineering (från engelskans "recombination-mediated genetic engineering") är en genetisk och molekylärbiologisk teknik baserad på homolog rekombination, till skillnad från de äldre och mer vanliga metoderna att med hjälp av restriktionsenzymer och ligas sammanfoga DNA-sekvenser i en specifik ordning. Recombineering används ofta inom bakteriell genetik, för att skapa vektorer för att göra knockoutmöss, för att modifiera DNA klonat på plasmider i bakterier, samt inom andra applikationer.
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| - Recombineering (englisch von recombinogenic engineering) bezeichnet eine molekularbiologische Methode zur Manipulation von DNA, basierend auf der homologen Rekombination von Escherichia coli, die unter dem Synonym Red/ET Rekombination bekannt ist. Recombineering basiert auf der homologen Rekombination, die von Proteinen, die aus Bakteriophagen stammen, in Escherichia coli vermittelt wird. Zwei homologe Systeme sind bekannt. Das RecE/RecT des Rac-Prophagen und das red-Operon bestehend aus Redγ, Redβ und Redα vom Bakteriophagen λ. Beide Systeme erlauben den effizienten und exakten Austausch frei wählbarer DNA-Abschnitte zwischen zwei unterschiedlichen DNA-Molekülen. Das red-Rekombinationssystem wird dabei am häufigsten verwendet. Der Austausch von DNA erfolgt über zwei dem Zielfragment flankierende homologe (ähnliche oder identische) Bereiche mit einer Länge von 30 bis 50 Bp.
- Recombineering (recombination-mediated genetic engineering) is a genetic and molecular biology technique based on homologous recombination systems, as opposed to the older/more common method of using restriction enzymes and ligases to combine DNA sequences in a specified order. Recombineering is widely used for bacterial genetics, in the generation of target vectors for making a conditional mouse knockout, and for modifying DNA of any source often contained on a bacterial artificial chromosome (BAC), among other applications.
- Recombineering (da recombination engineering, ingegneria di ricombinazione) è una tecnica di modificazione del DNA basata sulla ricombinazione omologa dell'Escherichia coli. In particolare, il sistema di ricombinazione omologa è alquanto diverso da quello classico dell'ospite batterico basato sulle proteine RecBCD e RecA. Il sistema di ricombinazione omologa impiegato nel recombineering è caratterizzato da un'attività esonucleasica, rappresentata dalla proteina Redalpha (5'>3' esonucleasi) e da un'attività di annealing rappresentata da Redbeta. Entrambe queste proteine sono codificate dal fago lambda (geni exo e bet rispettivamente). Una terza proteina (Redgama, codificata dal gene gam) incrementa l'efficacia di questo sistema inibendo un'attività esonucleasica dell'ospite (RecBCD). In alternativa a questo sistema è possibile utilizzare quello basato sulle proteine RecE e RecT. Tale sistema, pur non essendo del tutto simile a quello basato su Redalpha e Redbeta, condivide le stesse attività enzimatiche con il sistema Redalpha/Redbeta. La principale caratteristica della ricombinazione omologa che avviene durante la reazione di recombineering, è la presenza di regioni di omologia al DNA in cui ricombinare, piccole fino a 30 nucleotidi, su entrambi i lati del DNA ricombinante. Questa regione di omologia può essere facilmente inserita in oligonucleotidi usati per amplificare mediante PCR il DNA ricombinante. La metodologia di recombineering sta man mano soppiantando quella basata sull'uso di enzimi di restrizioni e DNA ligasi per ingegnerizzare il DNA. Questo in particolar modo quando il DNA da modificare è rappresentato da grossi costrutti come BAC, PAC, DNA cromosomico, ecc.
- Recombineering (från engelskans "recombination-mediated genetic engineering") är en genetisk och molekylärbiologisk teknik baserad på homolog rekombination, till skillnad från de äldre och mer vanliga metoderna att med hjälp av restriktionsenzymer och ligas sammanfoga DNA-sekvenser i en specifik ordning. Recombineering används ofta inom bakteriell genetik, för att skapa vektorer för att göra knockoutmöss, för att modifiera DNA klonat på plasmider i bakterier, samt inom andra applikationer.
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